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（2） 羽根浸液琼扩
将MD阳性血清加入中间孔，受检羽根浸液加周围孔，每个检样用一孔，并设阳性MD 抗原对照，记录鸡号的方法，同血清琼 扩。
５、 将平皿置湿清加入中，于37℃进行扩散。
６、 24小时后观察实验结果，出现沉淀线则为MD阳性鸡。
四、 思考题
１、 羽根琼扩和血清琼扩各适用于何种月龄 的鸡的MD诊断？为什么？
２、 血清琼扩在实际工作中还可用于哪些禽病的诊断？
３、 用鸡血清进行琼 扩试验，应用什么浓度NaCL 的琼 脂板？
４、 琼扩试验的原理是什么？
５、 琼脂平板的保存应注意什么问题？
五、 示教试验：MDV单抗分型鉴定（IIF）
注：鸡传染性法氏囊病（IBD）的琼扩诊断是取待检鸡血清与传染性法氏囊病诊断抗原作琼扩试验，其原理和操作方法同MD 的血清琼 扩试验。
实验七 沙门氏菌快速检验试验
一、 目的
了解沙门氏菌快速检验的方法和原理；
掌握FA和ELISA的操作步骤
二实验器材
使用仪器、器械、试液，请参阅前述有关章节模拟待检样品
三实验步骤
（一） 直接免疫荧光试验检测沙门氏菌
１、 取胜模拟样品增菌培养物10ml，于载玻片上涂成2cm（）面积的薄膜，空气干燥。
２、 以4℃或…20丙酮固定涂膜，室温10—15分钟，晾干。
３、 加染荧光抗体（FITC标记兔抗菌素沙门氏菌血清或O 抗菌素原单抗），37℃45分钟。
４、 PBS PH7。4 0。01M搅拌下洗涤10分钟；晾干。
５、 于荧光镜下镜检，阳性样品在细菌四周有特异性黄绿色荧光，而阴性样品未见黄绿色荧光。
（二） 单抗夹心ELISA试验检测沙门氏菌
１、以方阵试验确定单抗包被浓度和酶标制剂的使用浓度。
２、以pH9。6碳酸盐缓冲液包被单抗，100ul/孔，4℃过夜，或37℃2hr。
３、PBST洗涤三次。
４、以10％CFS…PBS封闭37℃3hr。
５、PBST洗涤三次。
６、加模拟样品增菌液，100ul/孔；室温15分钟。
７、PBST洗涤三次。
８、加新配套OPD底物缓冲液，100ul/孔；室温15分钟。
９、2M HSO终止反应（100ul/孔）。
10、加新配OPP底物缓冲液，100ul/孔，室温15分钟。
11、2M H2SO4终止反应（100ul/孔）
12、肉眼判定或测定OD496值。
（三） 示教试验 沙门氏菌O…I噬菌体裂解试验。
实验八 鸡白痢的诊断
一、 目的
掌握快速全血平板凝集反应并用来诊断鸡白痢。
二、实验器材
小搪瓷盘 铁丝环 滴管 玻璃板 干净纱布 24号针头 7号针头 灭菌大平皿
生理盐水 鸡白痢凝集抗原液
三、实验步骤
（一） 快速全血平板凝集试验
１、 将鸡白痢诊断抗原液充分振荡混匀，用滴管吸取抗原滴2滴于玻板上。
２、 一人保定鸡，另一人用7号针头刺破被检鸡的翅静脉使其出血。
３、 用铁丝环沾取一滴环血液与玻板上的抗原液搅拌均匀，并涂开至直径约1。5cm大小的涂面。
４、 25℃时，于2分钟内出现明显的凝集颗粒或凝集片则为阳性反应。
（二） 示教实验
１、 鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定；
２、 间接血凝试验；
３、 琼脂扩散沉淀试验；
４、 抗体竞争ELISA试验。
注：鸡慢性呼吸道病的现场诊断是慢性呼吸病平板凝集抗原与受检全血做凝集试验。操作方法同鸡白痢的快速全血玻板凝集实验。